组织培养繁殖的最大优势是具有较高的扩增速度,在母本较少的情况下能够在较短的时间内迅速增加母体株数。组织培养在蓝莓的繁殖上已被广泛采用此外。通过运用组培脱毒技术,还可恢复种性,保证高产。 一、外植体 适宜用作蓝莓外植体的材料有茎尖、茎尖生长点、茎段、腋芽、幼叶和叶柄等。也有人用实生苗的子叶和上胚轴作外植体,但这种方法在实际生产上似乎没有意义。茎尖取材方便,增殖容易,是组织培养较好的外植体。如果通过组织培养脱毒,则应取带2个叶原基的茎尖生长点作为外植体;生长点培养操作难度较大,成功率较低。蓝浆果枝条具有顶芽自枯现象,只有在生长期长、生长旺盛的枝条上才容易获得带生长点的茎尖,因此,在母本材料较少的情况下有时不易获取外植体,培养也比较容易。幼叶和叶叶柄用作外植体的情况虽有报道,但诱导不定芽的难度显然比促进顶芽生长的难度大。因此,建议在一般情况下要尽量用茎尖或茎段作外植体,只有材料实在难得时才考虑用叶片或叶柄作外植体。 二、培养基 蓝浆果茎尖培养时间使用的培养基主要有改良MS培养基、改良WPM培养基和改良KNOPS培养基等。 科恩(Cohenn)和艾伦奥特(Elliot)在培养高丛蓝浆果时将MS培养基德矿物质浓度降低到1/2MS或1/4MS水平,含0.02毫克/升萘乙酸(NAA)和LS维生素浓度(100毫克/升肌醇和0.4毫克/升盐酸硫胺素)时获得成功,后发现1/2优于1/4MS,但有人认为1/4MS更好。陈慧都等在半高丛蓝浆果和矮丛蓝浆果的部分品种上用改良WPM培养基(将WPM培养基种的磷酸二氢钾含量加倍,硝酸钙含量增加1/4)加0.5~1毫克/升玉米素取得很好的增值效果。拉瑞恩(Lyrene)在兔眼蓝浆果茎尖培养时用含有琼脂、水解酪蛋白和异戊烯基腺嘌呤(2-ip)的改良Konps培养基获得成功。 三、培养方法 外植体经0.1%升汞消毒5~10分钟后,用无菌水冲洗,并用无菌滤纸吸去表面水分。将切口切去少许,接种在事先准备好的试管培养基上,然后将试管口封住。消毒后的所有 操作均在超净工作台上进行。接种后的材料放进培养室培养,诱导幼枝增生。幼枝增生后,将幼枝切成2~3节的小茎段,作为新的外植体进行继代培养。经过连续的继代培养扩大到一定数量以后,将幼枝切下,转移到生根培养基中诱导生根。生根苗经过逐步炼苗后移栽。 生根苗移栽的基质可以选用树皮、松树锯屑、粗沙和土壤按不同比例配制成混合基质进行盆栽,或用等量泥炭和珍珠岩的混合基质。用90%松树锯屑和10%粗沙的基质幼枝根系生长较好。 移栽时对生根苗根系的破坏往往较大,移栽后对湿度要求较高,需精心管理。 四、试管外生根 由于试管内生根后需要炼苗,而且生根苗的根系长在培养基中,移栽比较复杂,对根系的破坏性大,因此,有人曾试验让幼枝在试管外生根。其做法是:当幼枝在生根培养基中培养至即将生根时即从试管中取出,转移至移栽基质中,然后按照全光照扦插的方式进行管理,取得了很好的效果。也有人不经过生根培养基,而将增殖后的幼枝切下后经工趾(吲哚丁酸)等生长素类生长调节剂处理后直接扦插于基质上,也获得了成功,这种方法所需时间比前一种方法要长一些。