针对目前国内红掌和凤梨种苗主要依赖进口的现实问题,本文就引进市场上热销的颇有潜力的红掌和观赏凤梨品种,采用现代植物组织培养技术和温室大棚栽培技术,研究开发和推广质优价廉的组培苗,希望对国内同行有一定的参考价值。 一、引进名优品种 在国内外市场上畅销的名优品种,如亚利桑娜、热情、情人红、粉冠军等红掌,以及吉利红星、丹尼斯等凤梨。引进的主要形式是母株外殖体。 二、无菌系建立和维持 根据课题设计的技术路线,一方面从植株采取幼嫩茎段或芽段,进行常规消毒后,接种到培养基上;另一方面,采取幼嫩叶片,进行常规消毒后,接种到诱导培养基上。 茎段或芽段的消毒方法:取嫩的茎段或芽段在自来水中冲洗10分钟,放进无菌水中浸泡30秒钟,用0.1%灭菌消毒15秒钟,用无菌水冲洗2次后放进70%酒精泡30秒钟,再用0.1%的升汞浸泡20分钟,最后用无菌水冲洗3次,可以在超净台上进行接种。 叶片消毒方法:取嫩叶用70%的酒精擦拭表面,接着在无菌水中洗2分钟,把叶片切成1平方厘米,放进加有1~2滴吐温80的1%NaOCI溶液浸泡30秒,放在超净台上用无菌水;中洗3~4次,就可以接种。 结果表明,在茎段培养方面没有取得突破性进展,主要问题在于不能彻底消毒。若消毒时间不够,接种材料很快污染;消毒时间过长,则往往会将材料杀死;有时候,一些材料在初代接种时既没有污染,也没有死亡,但往往在转瓶继代培养时又出现污染。这种污染往往是由内生细菌污染引起。 叶片培养途径的成功率高,可达80~90%以上。但是,这种方法所需要的时间也较长,叶片培养完成脱分化和再分化的时间少则半年,多则一年以上;而且,叶片培养对培养基的要求也较为苛刻,期间需要不断调整培养基。筛选出一些主要品种叶片培养途径所需的培养基配方,成功地获得了无菌种芽。 三、工厂化生产红掌和凤梨组培苗 经过多次试验,最终筛选出适合的增殖和生根培养基(表2),红掌继代培养的时间为40~45天,凤梨继代培养的时间为50~60天,具体还需要观察增殖芽的长势情况;培养的条件为温度为25~30摄氏度,光照强度为1500~2500LUX,每天人工光照14~16小时;接种时除了控制降低污染率外,还要注意到在切割时凤梨的生长点较低,不要切掉生长点,同时要去掉老的愈伤组织。 从培养基的筛选、培养条件的控制、切割方法的试验,使增殖率MR值为2.5(红掌)和3.0(丹尼斯凤梨),生根率达到98%以上。实现了工厂化生产,建立起工厂化快繁体系。依托该体系,可以使1瓶无菌种芽在10个月时间内扩增到1000瓶以上。 在组培过程中,必须注意控制种芽的增殖代数,通常在18代以下,这样既可以保证质量和数量要求,也为后续种芽的开发提供了充裕的时间。同时,为保证种芽质量,降低污染率项目组还配备有专门的质检人员加强管理,从水质的检测、培养基配制、人工切割、环境条件的控制一直到培养空间的消毒均采取一系列有效的措施,及时发现和处理不正常的种芽,如玻璃苗、花叶、皱叶等。 四、组培苗的培育和驯化 当组培苗在培养瓶中生长成为完整的植株后,经过一段时期的炼苗,则需要将瓶苗取出来,清洗干净,消毒,移栽到栽培基质中,再经过一段时期的培育,达到一定的规格以后,方可作为成品种苗销售。 在组培苗的培育和驯化的各个阶段,应制订严格的操作规程,由花棚专门的栽培技术人员执行。首先组培苗出瓶时要严格地消毒,方法是将健壮无污染的组培苗小心取出用清水洗)争残余的培养基,放入1000倍50%的多菌灵溶液中浸30秒后即可;栽培用的基质是由泥炭、珍珠岩和椰糠等按照一定的比例调配而成,经过消毒处理后备用;红掌组培苗的移基质为泥炭土∶珍珠岩=6∶1,凤梨组培苗移栽基质为泥炭:珍珠岩∶椰糠=4∶1∶3;培养的条件是温度控制在自天25~30摄氏度,夜晚20~25摄氏度,湿度60~80%,光线强度在8000~15000LUX为佳,温度低于。15摄氏度或高于33摄氏度时容易受到伤害(红掌组培苗比凤梨组培苗更容易受到伤害);因组培苗比较娇嫩易受病菌的感染,移栽的环境和所用的工具、用具都必须清洗干净,经过高锰酸钾溶液漂洗消毒以后方可使用。结果表明,红掌和凤梨组培苗的移栽成活率达到98%以上,组培苗3~4厘米经过50~60天的培养即可以达到出货的标准。