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基因检测实验步骤 | 基因检测过程

1. 基因检测过程

检测目的基因是否转录通常采用分子杂交的方法。

基因表达分为转录及翻译两阶段,转录是以DNA(基因)为模板生成mRNA的过程,翻译是以mRNA为模板生成蛋白质的过程,检测外源基因的表达就是检测特异mRNA及特异蛋白质的生成。所以基因表达检测分为两个水平:即转录水平上对特异mRNA的检测和翻译水平上对特异蛋白质的检测。

转录水平上的检测主要方法是Northern杂交,它是以DNA或RNA为探针,检测RNA链。和Southern杂交相同,Northern杂交包括斑点杂交和印迹杂交。   

也可用RT-PCR(reverse transcribed PCR)方法检测外源DNA在植物体内的转录表达。其原理是以植物总RNA或mRNA为模板进行反转录,然后再经PCR扩增。如果从细胞总RNA提取物中得到特异的cDNA扩增条带,则表明外源基因实现了转录。此法简单、快速,但对外源基因转录的最后决定,还需与Northern杂交的实验结果结合

2. 基因检测过程中会存在上机不合格这一说

  在实验室中,某些对于动物的研究课题试验,往往需要先将动物组织进行研磨前处理,而手动研磨不容易达到预期的研磨效果,不能获取到合格的检测样品。实验室研磨动物组织,我们可以借助专用的动植物组织研磨仪器,简便且有效。

  在分子生物学实验中,动物的肌肉组织、结缔组织、骨组织、毛发组织等,植物的根、茎、叶、种子等均需磨碎,进而对其成分、基因与蛋白质及结构和功能进行研究。为了使各种组织成分在研磨过程中不易被破坏或降解,又为了使组织变硬、脆性增加,从而易于磨碎,特别是有关核糖核酸(RNA)、脱氧核糖核酸(DNA)的研磨分离提取。需要先将生物材料放置到液氮中快速冷冻,终止细胞内外一切生物反应,同时生物材料细胞完全冻硬、脆化,这样研磨可以达到很好的破胞效果,将细胞磨成粉,使里边的物质释放出来。

  1.动物组织研磨(均质):将1-2g样品加入15ml短研磨瓶中,加入2个11mm钢珠。研磨瓶置于冷冻盒中,在液氮中预冷10分钟。预冷处理后,上机研磨。。设置研磨速度1500rpm,研磨时间2min。如果样品必须出于低温状态,在将样品装入研磨瓶之前,需在液氮中预冷冻研磨瓶。

  2.植物组织研磨(分解):将50mg样品加入2ml研磨罐中,再将研磨罐置于2ml泡沫架中,或者带4mm研磨钢珠的96孔深孔板中。上机研磨,设置研磨速度1500rpm,研磨时间1min。根据用户方法一般需要加入裂解液或缓冲液。

3. 基因检测是怎么一个过程

操作流程如下:

1、测序文库的构建 首先准备基因组,然后将DNA随机片段化成几百碱基或更短的小片段,并在两头加上特定的接头。如果是转录组测序,则文库的构建要相对麻烦些,RNA片段化之后需反转成cDNA,然后加上接头,或者先将RNA反转成cDNA,然后再片段化并加上接头。

2、锚定桥接 Solexa测序的反应在叫做flow cell的玻璃管中进行,flow cell又被细分成8个Lane,每个Lane的内表面有无数的被固定的单链接头。上述步骤得到的带接头的DNA 片段变性成单链后与测序通道上的接头引物结合形成桥状结构,以供后续的预扩增使用。

3、预扩增 添加未标记的dNTP 和普通Taq 酶进行固相桥式PCR 扩增,单链桥型待测片段被扩增成为双链桥型片段。通过变性,释放出互补的单链,锚定到附近的固相表面。通过不断循环,将会在Flow cell 的固相表面上获得上百万条成簇分布的双链待测片段。

4、单碱基延伸测序 在测序的flow cell中加入四种荧光标记的dNTP 、DNA聚合酶以及接头引物进行扩增,在每一个测序簇延伸互补链时,每加入一个被荧光标记的dNTP就能释放出相对应的荧光,测序仪通过捕获荧光信号,并通过计算机软件将光信号转化为测序峰,从而获得待测片段的序列信息。

5、数据分析 这一步严格来讲不能算作测序操作流程的一部分,但是只有通过这一步前面的工作才显得有意义。测序得到的原始数据是长度只有几十个碱基的序列,要通过生物信息学工具将这些短的序列组装成长的Contigs甚至是整个基因组的框架,或者把这些序列比对到已有的基因组或者相近物种基因组序列上,并进一步分析得到有生物学意义的结果。

4. 基因检测操作

肿瘤基因检测,是针对引起肿瘤的致病突变进行的检测。根据检测目的主要分为两类:指导肿瘤患者的精准治疗,评估肿瘤患者的亲属罹患肿瘤的易感性。

肿瘤的本质是体细胞突变累积的结果。通过二代测序技术检测患者的肿瘤组织中含有哪些突变,确认引起在肿瘤发生过程中发挥驱动作用的突变,就可以针对性使用靶向药物。靶向药物相比传统化疗药物具有针对性强,副作用小的优点,可有效改善肿瘤患者的预后。靶向药物在肺癌治疗中的应用经验最丰富。目前有条件的肺癌患者需要常规进行基因检测,有助于临床医生选择个体化的医疗方案。

有一些肿瘤的遗传性很强,比如卵巢癌,乳腺癌,结直肠癌等。这意味着肿瘤患者的亲属也有可能发生肿瘤。最著名的例子是安吉丽娜朱莉,她的妈妈和姨妈都患有乳腺癌,提示她的家族可能存在乳腺癌致病基因。为了确认自己是否携带相关致病基因,她进行了BRCA基因检测,发现自己果然携带这个BRCA1基因突变。

携带这种基因突变并不意味着一定发生肿瘤,但是肿瘤发生的风险要远高于一般人。因此她先后切除了乳腺和卵巢,预防乳腺癌和卵巢癌的发生。需要注意的是,进行这种基因检测,使用的是血液样本。

以上只是简单介绍了肿瘤基因检测的两个最主要目的。实际上根据不同的检测技术和检测样本,肿瘤基因检测还可以实现肿瘤早期筛查和诊断,肿瘤动态检测,肿瘤患者预后等多种目的。肿瘤基因检测专业性较强,需要配套相应的遗传咨询,与临床,实验室,患者三方面充分沟通,才能全面发挥肿瘤基因检测的重要作用。

5. 基因检测过程中如何保证检测标本的质量

主要考你基本的pcr实验操作,比如说试剂的配置。Pcr仪的基本操作程序设置。以及遇到问题如何解决。

1.试剂准备阶段

试剂准备是PCR操作的第一个流程,需要在试剂贮存和准备区的超净工作台或生物安全柜进行,用确保无污染的移液器、枪头及容器等进行分装。所有的PCR体系都应该在-20℃保存,除了ddH2O之外,其余的试剂组份需完全融化之后再加入,以免影响浓度。配制反应体系应在快速进行,以减少非特异性扩增。体系配制完成之后应马上进行PCR反应。

2.样本制备阶段

样本制备是整个PCR反应中最为关键的环节,在接收样本时一定要确保样本的密封性以及样本编号的唯一性。严格遵守操作规程进行加样操作,操作时候尽量少说话或者不说话。所有操作需要在生物安全柜内进行,操作前后生物安全柜需要进行紫外灯消毒,注意生物安全柜中物品的排放。戴手套并勤于更换,要有「无核酸观念」。

3.核酸扩增

在核酸扩增环节需要选择质量好的Ep管,装入反应体系的EP管上机前混匀、离心,将管壁及管盖上的液体甩至管底部。在样本检测的同时设立对照(阳性对照、阴性对照、阴性模板、试剂对照)。同时严密检测PCR扩增仪的各项性能指标,其中对PCR扩增仪而言温度控制就意味着质量。

6. 基因检测过程图解

  基因鉴定时一定要先经过PCR技术,直接进行鉴定是不行的。  基因鉴定技术是一项生物学检测技术,人体细胞有总数约为30亿个碱基对的DNA,每个人的DNA都不完全相同,人与人之间不同的碱基对数目达几百万之多,因此通过分子生物学方法显示的DNA图谱也因人而异,由此可以识别不同的人。所谓“DNA指纹”,就是把DNA作为像指纹那样的独特特征来识别不同的人。由于DNA是遗传物质,因此通过对DNA鉴定还可以判断两个人之间的亲缘关系。  基因鉴定的原理其实是DNA分子杂交,这种分子杂交是在缓冲液中进行的,由于DNA分子杂交时,两个分子相遇的机会不是很大,所以就需要众多的带有目的基因的DNA与待测的DNA分子,而PCR技术就是将目的基因进行扩增的一种技术手段,所以在进行基因鉴定时并不是直接进行鉴定的,而是先进行PCR技术将目的基因扩增再进行鉴定。

7. 基因检测过程中,造成点位重测的原因

真正的基因检测一个点位要几千元,癌症的种类多,要全检测一遍的话,费用相当高。现在一些所谓的基因检测并不是真正的基因检测,是通过一些生理指标的检测,打了基因检测的旗号。;基因是生来就有的,只要出生了,检测出来也只有优生的意义,没有任何药物可以改变基因,号称可以通过检测出癌症基因来预防癌症只是一种盈利的方式而已。;关键是目前普通百姓不了解基因技术是什么,只知道是高科技。真正的基因检测一个点位要数千元。现在很多所谓的基因公司并不是做基因检测,而是通过一些生理指标反推可能是什么基因有问题,费用就低了。如果基因知识普及了,会是另一种情况。就像以前的炒纳米概念一样,曾经渗透到衣食住行各方面,现在没什么消息了。

8. 基因检测操作流程

你可以登录他们的网站然后按步骤查找检测结果。

打开网站网页链接

2.点击临床试验

3.找到检测结果查询,登录后查询即可。