羊人工授精是人为的利用器械采取公羊的精液,经过品质检查和一系列处理,再通过器械将精液输入发情母羊生殖道内,达到母羊受胎的配种方式。人工授精可以提高种公羊的利用率,既加速了羊群的改良进程,防止疾病的传播,又节约饲养大量种公羊的费用。 人工授精技术包括器械的消毒、采精、精液品质检查、精液的稀释、保存和运输、母羊发情鉴定和输精等主要技术环节。 1 消毒技术 1.1 器械的消毒 采精、输精及与精液接触的所有器械都要消毒,并保持清洁、干燥,存放在清洁的柜内或烘干箱中备用。假阴道要用2%的碳酸氢钠溶液清洗,再用清水冲洗数次,然后用75%的酒精消毒,使用前用生理盐水冲洗。集精瓶、输精器、玻璃棒和存放稀释液及生理盐水的玻璃器皿洗净后要经过30分钟的蒸气消毒,使用前用生理盐水冲洗数次。金属制品如开膣器、镊子、盘子等,用2%的碳酸氢钠溶液清洗,再用清水冲洗数次,擦干后用75%的酒精或进行酒精灯火焰消毒。 1.2 场地的消毒 准备一间向阳、干净的配种无菌室,要求地面平整,光线充足,面积为10~12平方米,室温为18℃~25℃。也可选择宽敞、平坦、清洁、安静的室外场所。日常消毒用1%新洁尔灭或1%高锰酸钾溶液进行喷洒消毒,每日于采精前和采精后各进行1次。每星期对采精室进行1次熏蒸消毒,所用药品是40%的甲醛溶液500毫升,高锰酸钾250克。 1.3 羊体的消毒 公羊实施配种前和情期母羊实施配种前,用1%新洁尔灭溶液对羊体进行反复消毒。 1.4 消毒应注意的问题 严格遵守消毒时间和消毒药品的配量要求;熏蒸消毒时,应关闭门窗,第2天应提前1小时到岗,敞开门窗;注意安全,防止物品损坏,每次消毒完毕,应及时关掉电源。 2 采精技术 2.1 采精前的准备 2.1.1 器械的准备:所有的器械都要提前清洗、干燥、消毒,存放于消毒柜内备用。 2.1.2 公羊的准备:种公羊第一次采精时的年龄应在1.5岁左右,不宜过肥,也不宜过瘦,初次参加采精的公羊,应先进行采精训练,方法是让其"观摩"其他公羊配种;或用发情母羊的尿液或分泌物涂抹在公羊鼻尖上,刺激性欲。采精调教训练成功后,才能进行正式操作。 2.1.3 假阴道的安装:安装假阴道时,先将内胎装入假阴道外壳,再装上集精瓶,注意内胎平整,不要出现皱褶。为保证假阴道有一定的润滑度,用清洁玻璃棒蘸少许灭菌凡士林,均匀涂抹在假阴道内胎和前三分之一处。为使假阴道温度接近母羊温度,从假阴道注水孔注入少量温水,使水约占内外胎空间的70%,假阴道温度在采精时应保持在40℃~42℃。注水后,再通过气体活塞吹入气体,使假阴道保持一定弹性,吹入气体的量一般以内胎表面呈三角形合拢而不向外鼓出为适宜。 2.2 采精 采精前用温水洗种公羊阴茎的包皮,并擦干净。将台羊保定后,引公羊到台羊处,采精时采精员站立在公羊的右侧,当种公羊爬跨时,迅速上前,右手持假阴道靠在母羊臀部,其角度与母羊的阴道的位置相一致(与地面成35~45度角),用左手轻托阴茎包皮,迅速将阴茎导入假阴道中。羊的射精速度很快,当发现公羊有向前冲的动作时即已射精,要迅速把装有集精瓶的一端向下倾斜,并竖起集精瓶,送精液到处理室,放气后取下集精瓶,盖好盖,并记录公羊号,放于操作台上进行精液品质检查。 2.3 采精频率 成年种公羊每日采精1~2次,连采3天休息1次,初采羊可酌减。 2.4 采精注意事项 严格遵守消毒技术要求,所有采精物品未经消毒不得应用。采精训练是一项细致的工作,必须由采精熟练人员负责进行。所用采精器的环境条件必须严格把握,温度要控制在40℃~42℃。 3 精液品质检查 精液品质检查的目的是为了评定精液品质的优劣,以便决定它能不能用于输精配种,同时,也为确定精液的稀释倍数提供科学依据。 3.1 外观检查 3.1.1 颜色:正常的精液为浓厚的乳白色,肉眼可看到乳白色云雾状。 3.1.2 气味:正常精液无味或略带腥味。 3.1.3 精液量:公羊一次采精的精液量一般为0.5~2.0毫升,山羊平均为0.8~1.0毫升,绵羊平均为1.0~1.2毫升。 经外观检查,凡带有腐败臭味,出现红色、褐色、绿色的精液判为劣质精液,应弃掉不用,一般情况下不再做显微镜检查。 3.2 显微镜检查 3.2.1 精子活率:精子的活率是指在38℃的室温下直线前进的精子占总精子数的百分率。检查时以灭菌玻璃棒蘸取1滴精液,放在载玻片上加盖玻片,在400~600倍显微镜下观察。全部精子都做直线运动评为1级,90%的精子做直线前进运动为0.9级,以下以此类推。 3.2.2 精子的密度:是指每毫升精液中所含的精子数。取1滴新鲜精液在显微镜下观察,根据视野内精子多少分为密、中、稀三级。"密"是指在视野中精子的数量多,精子之间的距离小于1个精子的长度;"中"是指精子之间的距离大约等于1个精子的长度;"稀"为精子之间的距离大于1个精子的长度。为了精确计算精子的密度,可用血球计数器在显微镜下进行测定和计算,每毫升精液中含精子25亿以上者为密,20亿~25亿个为中,20亿以下为稀。 3.3 精子质量的评定标准 精液为乳白色,无味或略带腥味,精子活力在0.6以上,密度在中等以上(每毫升精液的精子数在20亿以上),畸性精子率不超过20%,该羊精液判为优质精液。以上几项质量标准任何一项达不到要求,均被定为劣质精液。 3.4 精液检查时应注意的问题 做显微镜检查时,温检箱内温度控制在38℃左右。精液品质检查要求迅速准确,室内要清洁,室温保持在18℃~25℃。精子的形态检查,一般1周内对同1头公羊精液做1次染色检查,其他时间可根据经验做直观估测。 4 精液的稀释、分装、运输和保存 4.1 精液的稀释 精液稀释的目的是扩大精液量,增加每次采精的可配母羊数,提高种公羊的利用率,还可供给精子营养,增强精子活力,有利于精液的保存、运输和输精。 4.1.1 稀释液的配制:稀释液的配方选择易于抑制精子活动,减少能量消耗,延长精子寿命的弱酸性稀释液。 配方一:生理盐水稀释液:是用注射用生理盐水或经过过滤消毒的0.9%氯化钠溶液作稀释液。此种稀释液简单易行,稀释后的精液应在短时间内使用,是目前生产实践中最为常用的稀释液。但用这种稀释液稀释时,稀释的倍数不宜太高,一般以2倍以下为宜。 配方二:奶汁稀释液:奶汁先用7层纱布过滤后,再煮沸消毒10~15分钟,降至室温,去掉表面脂肪即可。这种稀释液稀释效果好,但稀释倍数不能太高,以3倍以下为宜。 配方三:葡萄糖卵黄稀释液:在100毫升蒸馏水中加葡萄糖3克、柠檬酸钠1.4克,溶解后过滤3~4次,蒸煮30分钟后灭菌,降至室温,再加新鲜卵黄(不要混入蛋白)20毫升,再加青霉素10万单位振荡溶解。这种稀释液有增加营养的作用,可作7倍以下的稀释。 4.1.2 精液的稀释倍数:要根据精子密度、活力而定稀释比例,稀释后的精液,每毫升有效精子数不少于7亿个。 4.1.3 精液稀释的操作步骤:根据镜检得出精子密度确定稀释倍数,根据稀释倍数计算出应加入的稀释液的量,用量杯量取应加的稀释液量。稀释前将两种液体置于同一温水中,然后将稀释液沿着精液瓶缓缓倒入,为使混合均匀可稍加摇动或反复倒动1~2次,稀释完毕后,立即进行活力镜检,并将镜检结果填人采精登记表。 4.1.4 精液稀释应注意的事项:稀释液温度与精液温度保持一致,在20℃~25℃室温和无菌条件下操作,精液稀释的倍数应根据精子密度而定,一般为1~3倍,稀释后的每毫升有效精子数不能低于7亿个。 4.2 精液的分装 将稀释好的精液根据各输精点的需要量分别装于2~5毫升小试管中,精液面距试管口不少于0.5~1.0毫升,然后用玻璃纸和胶圈将试管口扎好,在室温下自然降温。分装后贴上标签,标签上注明精液采出的日期、时间、活力、密度、公羊的品种。 4.3 精液的运输 在近距离运送精液时,不必进行降温,将装有精液的集精瓶或小试管口封严,用棉花包好放入保温瓶中即可。远距离运输时,可用直接降温法降温。运输精液时要防止剧烈震动,降温或升温都要缓慢进行,每次输送的精液都要注明公羊号、采精时间、精液量和精液品质。 4.4 精液的保存 4.4.1 常温保存:精液稀释后,保存在20℃以下的室温环境中。在这种条件下,精子运动明显减弱,可在一定限度内延长精子存活时间。常温保存只能保存1天。 4.4.2 低温保存:在常温保存的基础上,温度进一步缓慢降至0℃~5℃之间。可用直接降温法,将精液装入小试管内,外面包以棉花,再装入塑料袋内,直接放入装有冰块的广口保温瓶或保温箱中,使温度逐渐降至2℃~4℃。低温下保存的有效时间为2~3天。 4.4.3 冷冻保存:精液的冷冻保存要求的技术、环境和设备条件较严格,操作过程也比较复杂,这里不加详述。 5 发情鉴定 适时配种是提高羊人工授精受胎率的关键措施之一,母羊发情的主要表现:食欲减退、兴奋不安、嘶鸣、爬跨其他羊或接受其他羊爬跨而静立不动;阴门红肿,频频排尿而流出透明的黏液;用试情公羊与母羊接触(隔着试情架),母羊表现温驯,并将后躯转向公羊,阴门肿胀;用阴道开膣器插入阴道,使之开张,发情盛期的母羊阴道潮红、润滑,子宫颈口开张,分泌的黏液呈豆花样。 6 输精 6.1 输精前的准备 6.1.1 人员的准备:输精人员应穿工作服,用肥皂水洗手擦干,用75%酒精消毒后,再用生理盐水冲洗。 6.1.2 输精器械的准备:把洗涤好的开膣器、输精枪、镊子用纱布包好,一起用高压锅蒸汽消毒。 6.1.3 母羊的准备:对发情母羊进行鉴定及健康检查后,才能输精,母羊输精前,应对外阴部进行清洗,以1/3000新洁尔灭溶液或酒精棉球进行擦拭消毒,待干燥后再用生理盐水棉球擦拭。 6.1.4 精液的准备:将精液置于35℃的温水中升温5~10分钟后,轻轻摇匀,做显微镜检查,达不到输精要求的不能用于配种。 6.2 输精方法 将用生理盐水湿润后的开膣器插入阴道深部触及子宫颈后,稍向后拉,以使子宫颈处于正常位置之后轻轻转动开膣器90度,打开开膣器,开张度在不影响观察子宫的情况下开张的愈小愈好(2厘米),否则易引起母羊努责,不仅不易找到子宫颈,而且不利于深部输精。输精枪应慢慢插入到子宫颈内0.5~1.0厘米处,插入到位后应缩小开膣器开张度,并向外拉出1/3,然后将精液缓缓注入。输精完毕后,让羊保持原姿势片刻,放开母羊,原地站立5~10分钟,再将羊赶走。 6.3 输精次数和输精量 输精次数:母羊1个情期应输精2次,发现发情时输精1次,间隔8~10个小时应进行第2次输精。输精量:每头份的输精量,原精液为0.05~0.10毫升,稀释后精液应为0.1~0.2毫升。 6.4 输精时应注意的问题 输精人员要严格遵守操作规程,输精员输精时应切记做到深部、慢插、轻注、稍停。对个别阴道狭窄的青年母羊,开膣器无法充分打开,很难找到子宫颈口,可采用阴道内输精,但输精量需增加1倍。输精后立即做好母羊配种记录。每输完一只羊要对输精器、开膣器及时清洗消毒后才能重复使用,有条件的建议用一次性器具。