细胞冻存加dmso的作用 | 细胞冻存加入DMSO目的

1. 细胞冻存加入DMSO目的

在常温下，DMSO对人体有毒，故在配制时最好带手套。冻存液最好现用现配。在将细胞冻存管投入液氮时，操作过程中最好带防冻手套、面罩、工作衣或防冻鞋，动作要小心、轻巧，以免液氮从液氮罐内溅出，对皮肤造成冻伤。应注意控制冻存细胞的质量。

既要在冻存前保障细胞具有高活力，还要确保无微生物污染，这样的细胞才具有冻存价值。

另外，在每批细胞冻存一段时间后，可复苏1～2 管，以观察其活力以及是否受到微生物的污染。

冻存管宜采用塑料冻存管，不宜使用玻璃安瓿。

因为在复苏时，需要从-196℃的液氮中取出冻存管，立即投入37～40℃温水中，温差很大，玻璃安瓿瓶容易爆炸而发生危险。

2. 冻存细胞为什么要加dmso

冻存的原则是：慢冻，主要是防止细胞在冷冻过程中形成冰晶，对细胞造成损害，加DMSO也是这个原理。

复苏细胞的原则是：快融。主要是防止DMSO在液体状态下对细胞的毒害作用，快速使细胞进入复苏和生长状态。

因此，细胞的冻存与复苏原则应该是慢冻快融。分别经过4度，-20度，-80度和液氮的依次过程进行冻存；经过37度水浴1分钟之内解冻细胞冻存液进行复苏。

3. 细胞冻存加入dmso目的和原理

能用。

只要是避光保存，DMSO室温下很稳定的，光照会分解。你只要是避光保存了，就没有问题。

DMSO又称为二甲基亚砜，常用作细胞冻存，它可以破坏氢键的形成，从而防止冰晶的形成对细胞造成伤害。也可用作合成纤维的染色溶剂、去染剂、染色载体,以及回收乙炔、二氧化硫的吸收剂。

4. 细胞冻存加DMSO作用

细胞冻存的步骤：

　　1、选择活力好，密度约80%的细胞，此时细胞处于对数生长期，比较适合冻存。细胞冻存依旧分为贴壁细胞冻存和悬浮细胞冻存。

　　2、显微镜下观察细胞状态,若细胞密度较高，培养基变黄，需要换液4h之后再进行冻存操作，细胞长满后，将培养皿中的培养基用枪小心的吸去。再用PBS冲洗一到两次,尽量吸干净润洗的PBS，加入胰酶消化细胞,消化一定要注意控制胰酶作用时间，消化细胞时由于每个细胞贴壁性不一样，消化时间差别会很大,胰酶消化是需要比较精细的操作，既要充分消化下细胞打散成单细胞悬液，均匀接种，又要避免消化过度造成细胞严重受损。大家用的胰酶活力及消化步骤、试剂都是不一样的，所以不能完全规定消化时间，一般仪个人经验为准。

　　对于消化这步，建议按照下述操作：胰酶首先复温到室温后加入细胞，放入37℃培养箱，然后每隔30秒，吹打下细胞，如果能够吹打散细胞，说明细胞消化完成可以终止消化，之后混匀细胞时尽量轻柔，不要产生过多气泡。如果30秒不能分散，则再等30秒重复操作。

　　3、消化完成后加6-8ML完全培养基终止消化，混匀细胞，收集细胞悬液。

　　4、900-1000rpm离心3分钟，弃上清,加入配制好的冻存培养液，用吸管轻轻吹打使细胞均匀，将细胞分装入冻存管中，每管1～1.5 ml,在冻存管上标明细胞的名称，冻存时间及操作者,装有细胞的冻存管放入-4℃冰箱10分钟，然后放入-80℃冰箱中过夜，取出冻存管，移入液氮容器内。

　　5、24小时后取出一只冻存管复苏，检查活性及是否污染。

5. dmso保存细胞

DMSO的摩尔浓度为14.1 M，依据是密度1.1 g/mL和分子量78.13 g/ml。

过去，DMSO是从树皮中分离出来的。现在，它是一种商业合成的溶剂。

DMSO通常以1-10％的浓度使用，具体取决于细胞系。

DMSO的熔点为16-19℃，室温过低就凝固。这并不妨碍使用，可以缓慢加热令其重新液化，不会有任何影响。

DMSO可以用带0.2 μm PTFE膜的过滤器进行无菌过滤。

6. DMSO冻存细胞

DMSO一般用于细胞冻存保护剂和药物溶剂。

用作细胞保护剂的机理是，DMSO能在细胞膜上打洞，使细胞内的水分子能渗透出来，从而防止细胞冷冻过程中在细胞内形成冰晶、破坏细胞结构。过高浓度的DMSO会对细胞造成损伤，一般冻存操作采用的终浓度是10％。

其用作药物溶剂时，需要考虑DMSO具有诱导白血病细胞向红系分化和抑制某些细胞增殖的作用，可根据实验用的细胞类型做文献调研（一般建议低于0.5%），摸索合适的DMSO的用量。

7. 细胞冻存加入DMSO

1. 配制含10%DMSO或甘油、10～20%小牛血清的冻存培养液;

2. 取对数生长期的细胞，去除旧培养液，用PBS清洗。

3. 去除PBS，加入适量胰蛋白酶(覆盖培养皿表面)把单层生长的细胞消化下来;

4. 离心1000rpm，5min;

5. 去除胰蛋白酶，加入适量配制好的冻存培养液，用吸管轻轻吹打使细胞均匀，计数，调节冻存液中细胞的最终密度为5×106/ml～1×107/ml;

6. 将细胞分装入冻存管中，每管1～1.5 ml;

7. 在冻存管上标明细胞的名称，冻存时间及操作者;

8. 冻存：标准的冻存程序为降温速率-1～-2℃/min;当温度达-25℃以下时，可增至-5℃～-10℃/min;到-100℃时，则可迅速浸入液氮中。也可将装有细胞的冻存管放入-20℃冰箱2h，然后放入-70℃冰箱中过夜，取出冻存管，移入液氮容器内。

8. 细胞冻存 dmso

细胞冻存是细胞培养、引种、保种和保证实验顺利进行的重要技术手段。

在细胞建株和建系中，及时冻存原始细胞是十分重要的。在杂交瘤单克隆抗体的制备过程中，杂交瘤细胞、每次克隆化得到的亚克隆细胞的冻存保种常常是必不可少的实验操作。因为在没有建立一个稳定的细胞系或稳定分泌抗体的细胞系的时候，细胞的培养过程中随时可能因细胞的污染、分泌抗体能力的丧失或遗传变异等等导致实验失败，如果没有原始细胞的冻存，则因为上述的意外而前功尽弃。索莱宝细胞冻存常用冻存液的成分如下：20％血清（FBS）、10％DMSO、70％1640培养液；或90％血清（FBS）、10％DMSO，更可防止细胞内冰晶形成。将DMSO和FBS加入DMEM中，各自含量占总体积的10%，然后滤膜过滤后分装保存备用。