1. 引物的作用是什么
引物
引物,是指在核苷酸聚合作用起始时,刺激合成的一种具有特定核苷酸序列的大分子,与反应物以共价键形式连接,这样的分子称为引物。引物通常是人工合成的两段寡核苷酸序列,一个引物与靶区域一端的一条DNA模板链互补,另一个引物与靶区域另一端的另一条DNA模板链互补,其功能是作为核苷酸聚合作用的起始点,核酸聚合酶可由其3端开始合成新的核酸链。体外人工设计的引物被广泛用于聚合酶链反应、测序和探针合成等。
2. 什么叫引物
引物,是指在核苷酸聚合作用起始时,刺激合成的一种具有特定核苷酸序列的大分子,与反应物以氢键形式连接,这样的分子称为引物。
引物通常是人工合成的两段寡核苷酸序列,一个引物与靶区域一端的一条DNA模板链互补,另一个引物与靶区域另一端的另一条DNA模板链互补,其功能是作为核苷酸聚合作用的起始点,核酸聚合酶可由其3端开始合成新的核酸链。
体外人工设计的引物被广泛用于聚合酶链反应、测序和探针合成等。
3. 引物的作用是什么高中
引物的功能是作为核苷酸聚合的起始点,引导DNA的合成。
能设定循环次数,及控制复制次数。PCR循环次数主要取决于模板DNA的浓度。一般的循环次数选在30~40次之间,循环次数越多,非特异性产物的量亦随之增多。
4. 引物的作用是什么意思
引物,是指在核苷酸聚合作用起始时,刺激合成的一种具有特定核苷酸序列的大分子,与反应物以共价键形式连接,这样的分子称为引物。
引物通常是人工合成的两段寡核苷酸序列,一个引物与靶区域一端的一条DNA模板链互补,另一个引物与靶区域另一端的另一条DNA模板链互补。
所有的DNA复制都是从一个固定起点开始的,而且目前所知的DNA聚合酶都只能延长DNA链而不能从头合成DNA链。DNA复制时,往往先由RNA聚合酶在DNA模板上合成一段RNA引物,再由DNA聚合酶从RNA引物3’末端开始合成新的DNA链。
作用机理:引物是人工合成的两段寡核苷酸序列,一个引物与目的基因一端的一条DNA模板链互补,另一个引物与目的基因另一端的另一条DNA模板链互补。
在PCR(聚合酶链式反应)技术中,已知一段目的基因的核苷酸序列,根据这一序列合成引物,利用PCR扩增技术,目的基因DNA受热变性后解链为单链,引物与单链相应互补序列结合,然后在DNA聚合酶作用下进行延伸,如此重复循环,延伸后得到的产物同样可以和引物结合。
5. 引物的本质及作用
1.DNA聚合酶一般特指以DNA为指导,消耗dNTP生成DNA的酶。
在原核生物中主要是Ⅰ和Ⅲ等五种,后者承担主要复制活性,不同亚基有不同功能;前者负责纠错和修复。
在真核生物中有非常多种DNA聚合酶,其中DNA pol α参与引物链的合成;DNA pol β参与SOS修复;DNA pol γ参与线粒体DNA复制,DNA pol δ和DNA pol ε分别参与后随链和前导链的复制,DNA pol δ还参与DNA损伤的修复。
2.RNA聚合酶以DNA为指导,消耗NTP生成hnRNA。
在原核生物中是一个大酶,有六个亚基。其中前五个在一起被叫做核心酶,第六个是σ因子,参与启动子的识别。
真核生物里RNA pol Ⅰ参与rRNA的合成;Ⅱ是最重要的,合成mRNA和一些sRNA;Ⅲ合成其他的sRNA。
3.逆转录酶有①依赖RNA的DNA聚合活性②核糖核酸酶H活性(用于水解tRNA引物)③依赖DNA的DNA聚合酶活性。也就是说,逆转录酶也是一种特殊的DNA聚合酶。
4.RNA复制酶很少提,易错高突变,很少需要引物。
硬是要说共同点的话..合成的方向都是3'→5',化学本质都是蛋白质。毕竟第四个连合成场所都不一样,实在不好找共同点。
6. 引物的作用是什么呢
RT-PCR就是将RNA先反转录为cDNA,在将转录得到的cDNA作为模板进行PCR反应扩增目标片段。用于反转录的引物根据实验的具体情况选择随机引物、OligodT及基因特异引物的一种。对于短的不具有发卡结构的真核细胞mRNA三种都可。
随机引物:适用于长的具有发卡结构的RNA。适用于rRNA、mRNA、tRNA等所有RNA的转录反应。主要用于单一模板的RT-PCR反应。
OligodT:适用于具有PolyA尾巴的RNA。(原核生物的RNA、真核生物的OligodTrRNA和tRNA不具有PolyA尾巴。)由于OligodT要结合到PolyA尾巴上,所以对RNA样品的质量要求较高,即使有少量降解也会使全长cDNA合成量大大减少。
基因特异引物:与模板序列互补,适用于目的序列已知的情况。
实时PCR也就是qPCR的基本原理与PCR也是一样的,只是在体系中加入荧光指示,可以对PCR的模板进行定量。
一种是加入荧光染料SYBRGreen,SYBRGreen会嵌入双链DNA的小沟,且只有在嵌入小沟时才会发出荧光,荧光定量PCR没进行一个循环就会对产物进行一次检测,通过检测每个循环后荧光强度(间接得知DNA的量)从而检测整个PCR的过程,最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析。SYBRGreen不具有特异性,对结果稍有影响。
另一种是加入荧光探针Taqman,PCR扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针,该探针为一寡核苷酸,两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。探针完整时,报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收;PCR扩增时,Taqman探针在PCR体系中会与目标片段杂交,而在PCR的Extension阶段Taq酶以一条链为模板合成目标片段,此时Taq酶的5'-3'外切酶活性将结合在模板上的探针酶切降解,使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离,从而荧光监测系统可接收到荧光信号,即每扩增一条DNA链,就有一个荧光分子形成,实现了荧光信号的累积与PCR产物形成完全同步。Taqman特异性强,只有被扩增出目标片段时,才有荧光发出,但是价格昂贵。
7. 引物是用来做什么的
引物是短的寡核苷酸片段,充当DNA复制的起点。因为几乎所有DNA聚合酶都不能从头合成,所以它们需要一个3’-羟基作为DNA合成的起始点。这个3’-羟基由相配的引物提供。
在体内,由于DNA聚合酶的忠实性,不能从头合成DNA,因此只能由RNA聚合酶(称为引物酶)生成,采用RNA引物来延伸,在延伸过程中,RNA引物降解并由DNA取代。
在体外PCR反应中所用到的DNA引物,是根据不同的要求及模板序列设计,然后用化学法人工合成的,与模板形成双链后在DNA聚合酶的作用下就可以继续链的延伸;对于大多数PCR反 应,决定整个反应成功与否的最重要因素是引物的序列和质量。
8. 引物作用原理是怎样的
这可能与尽量减少DNA复制起始处的突变有关。DNA复制开始处的几个核苷酸最容易出现差错,因此,用RNA引物即使出现差错最后也要被DNA聚合酶Ⅰ切除,提高了DNA复制的准确性。
RNA有3‘OH是一个原因,最主要的是RNA是单链,而且容易被降解。机体选择RNA做引物是为了避免错配,因为即使引物RNA的碱基序列出现差错,可以很容易被降解,然后通过DNA的修复功能即可复制出正确的序列,是一种保护机制。如果是DNA做引物则不容易被降解。我们体外对DNA进行扩增时则是使用的DNA引物,因为DNA引物不容易被降解。
9. pcr过程中引物的作用是什么
在PCR(聚合酶链式反应)技术中,已知一段目的基因的核苷酸序列,根据这一序列合成引物,利用PCR扩增技术,目的基因DNA受热变性后解链为单链,引物与单链相应互补序列结合,然后在DNA聚合酶作用下进行延伸,如此重复循环,延伸后得到的产物同样可以和引物结合。
10. 引物是指什么
PCR的技术的主要步骤及PCR引物设计的一般原则分述如下: PCR的技术的主要步骤:
1、DNA变性:(90℃-96℃):双链DNA模板在热作用下,氢键断裂,形成单链DNA。
2、退火:(60℃-65℃):系统温度降低,引物与DNA模板结合,形成局部双链。
3、延伸:(70℃-75℃):在Taq酶(在72℃左右,活性最佳)的作用下,以dNTP为原料,从引物的3′端开始以从5′→3′端的方向延伸,合成与模板互补的DNA链。
每一循环经过变性、退火和延伸,DNA含量即增加一倍。
现在有些PCR因为扩增区很短,即使Taq酶活性不是最佳也能在很短的时间内复制完成,因此可以改为两步法,即退火和延伸同时在60℃-65℃间进行,以减少一次升降温过程,提高了反应速度。 2、引物设计的基本原则 1、引物长度:15-30bp,常用为20bp左右。
2、引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C 过多易出现非特异条带。
ATGC最好随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列参照。
3、引物内部不应出现互补序列。
4、两个引物之间不应存在互补序列,尤其是避免3 ′端的互补重叠。
5、引物与非特异扩增区的序列的同源性不要超过70%,引物3′末端连续8个碱基在待扩增区以外不能有完全互补序列,否则易导致非特异性扩增。
6、引物3‘端的碱基,特别是最末及倒数第二个碱基,应严格要求配对,最佳选择是G和C。
7、引物的5 ′端可以修饰。
如附加限制酶位点,引入突变位点,用生物素、荧光物质、地高辛标记,加入其它短序列,包括起始密码子、终止密码子等。
11. 引物的前提
1)PCR的含义:是一项在生物体外复制 的核酸合成技术。
(2)目的:获取大量的目的基因,前提:一段 序列,根据序列设计合成引物(3)原理: (4)特点:指数形式扩增
(5)过程:第一步:加热至90-95℃DNA解链为单链;
第二步:冷却到55-60℃, 与两条单链DNA结合;
第三步:加热至70-75℃, 酶从引物起始进行互补链的合成。