1. 裂解液使用方法
RIPA裂解液(RIPA Lysis Buffer)对动物细胞胞膜、胞浆、胞核成分均有较强裂解作用,RIPA裂解液裂解得到的蛋白样品可以用于常规的Western、IP等。
RIPA裂解液的原理如下:
RIPA主要是从动物组织和动物细胞中抽取的可溶性蛋白。RIPA 组织/细胞裂解液是利用表面活性剂等来裂解细胞膜(包括核膜)。
索莱宝高效RIPA裂解液的使用方法
如发现RIPA有沉淀,请放室温半小时或者常温水浴使沉淀溶解。
根据使用量,取每1ml RIPA 加入10ul PMSF,使PMSF的终浓度为1mM。混匀备用 (PMSF现用现加)。
2. 裂解液保存
动物组织提取出的RNA保存方式如下:
取新鲜组织(注:生物体死亡后10分钟内取材料并保存好),组织块以PBS或生理盐水清洗干净,每50~100 mg组织加1 ml Trizol溶液匀浆裂解组织样品,操作最好在冰上进行。
匀浆的裂解液4℃短期保存(1个月),-20度或- 70℃长期保存。
3. 裂解液使用方法图片
可以放
RIPA裂解液(RIPA Lysis Buffer)是一种传统的细胞组织快速裂解液。RIPA裂解液裂解得到的蛋白样品可以用于常规的Western、IP等
裂解液中SDS 4℃保存易沉淀析出,使用前应该37℃-60℃水浴重新溶解完全后回复到室温使用
裂解蛋白的所有步骤都需在冰上或4℃进行。
4. 裂解液作用
组织裂解液(全细胞蛋提取):
1:Tris-HCL 50mmoL/L PH 7.4
2:Nacl 150 mmoL/L
3:去氧胆酸钠 0.25%
4:NP-40或Triton-x-100 1%
5:EDTA 1 mmoL/L
6:PMSF 1 mmoL/L
7:Aprotinin 1μg/ml
8:leupeptin 1μg/ml
9:pepstain 1μg/ml
其中:7,8,9作用不持久,要使用前加入.
细胞裂解液:1:NP-40裂解体系: 150 mmoL/L Nacl
1.0%NP-40或Triton-x-100
50 mmoL/L Tris(PH8.0)
2:RIPA裂解体系:150 mmoL/L Nacl
1.0%NP-40或Triton-x-100
0.5%脱氧胆酸钠
0.1%SDS
50 mmoL/L Tris( ph8.0)
5. 裂解液用什么稀释
可以使用较为温和的裂解液例如RIPA裂解液(弱)或NP-40裂解液稀释
6. 红细胞裂解液使用方法
红细胞裂解液的原理是利用细胞内外存在盐离子浓度差异而导致细胞膜胀破,所以直接用水稀释就行了。