1. dna提取中te缓冲液的作用
利用中性去污剂NP-40破坏全血的红细胞膜,离心弃去溶血液,收集白细胞沉淀,加入去污剂SDS以破坏白细胞核膜,并使核蛋白解离,再加入高浓度的NaCl使DNA溶解,同时使蛋白盐析。通过离心收集水相,加2——2.5倍体积的无水乙醇,沉淀DNA。
实验步骤:
1.取EDTA抗凝血0.4ml,加入低盐缓冲液1ml,混匀。再加入20ul 20% NP-40,充分混匀溶血,此刻应看到溶血液变得透亮。
2.6000r/min 离心5min,弃溶血液,收集白细胞沉淀。
3.加入低盐缓冲液1ml,洗涤白细胞,6000r/min 离心 5min,弃溶血液。如果白细胞沉淀中还存在红细胞碎片,可再重复此步骤一次。
4.加低盐缓冲液200ul重悬白细胞沉淀,充分混匀。再加入10% SDS 15ul,混匀,室温下放置5min,使细胞充分裂解。加入SDS后操作要轻柔,避免产生的机械力是基因组DNA断裂。
5.加入6mol/L NaCl溶液75ul,充分混匀,120000r/min 离心10min。
6.将上清液转移到另一 Ep 管中,加2——2.5倍冰乙醇沉淀 DNA,120000r/min 离心10min。如果吸取的上清液混有沉淀,可以重新 12000r/min 离心一次,收集上清,加无水乙醇沉淀。
7.收集 DNA 沉淀,弃去冰乙醇,仔加入70%乙醇洗 DNA 一次,12000r/min 离心 10min,弃去乙醇。
8。风干乙醇后,加入50——100ul TE 缓冲液溶解基因组DNA。
2. 溶解DNA 的TE缓冲液组成成分是什么?各成分有啥作用?
Te创造出的”理智程式“是非常具有价值的,是深刻的对外部世界的规律总结。附加了大量理性思考,模型构建。如果遵守,对社会的运行效率提高有极大帮助。
Te使用者会认为自己所创立的“理智程式”具有普世价值,并会基于这些“理智程式”进行判断。符合程式发生规律的是正确的模式,而违背程式发生规律是不正确的模式。Te使用者认为这套“理智程式”是放之四海而皆准的,是真理,是正义
3. DNA上样缓冲液的成分及作用
dna上样缓冲液和rna上样缓冲液可以通用。因为DNA和RNA链上的碱基都基本一致。而这两种上样缓冲液中含有的染料是二甲苯青和溴酚蓝,都可以与其碱基结合,跑出条带。
但是,如果使用DNA上样缓冲液,里面会夹杂一些RNA酶,这些酶有可能会影响到实验结果。使用前需要将RNA酶处理掉。
4. te缓冲液溶解dna
TE缓冲液是由Tris和EDTA配制而成,主要用于溶解核酸,能稳定储存DNA和RNA。TE缓冲液是一种能在加入少量酸或碱时抵抗pH改变的溶液。
PH缓冲系统对维持生物的正常pH值,正常生理环境起重要作用。多数细胞仅能在很窄的pH范围内进行活动,而且需要有缓冲体系来抵抗在代谢过程中出现的pH变化。
5. te溶液在dna提取中的作用
可以
TE缓冲液是弱碱性,对DNA的碱基有保护性,(DNA在TE中的稳定性较好,不易被破坏其完整性或产生开环及断裂),包括提取好的DNA也要放在TE缓冲液中保存.
1)紫外吸收法测定
先用稀释用的TE溶液将分光光度计调零。然后取少量RNA溶液用TE稀释(1:100)后,读取其在分光光度计260nm和280nm处的吸收值,测定RNA溶液 浓度和纯度。
6. DNA提取过程中,裂解缓冲液中用到的EDTA有什么作用?
western blotting的Lysis buffer,是裂解细胞提取蛋白用的裂解液.
SDS是十二烷基硫酸钠,
RIPA裂解液组成: 50 mM Tris-HCl (pH 7.4,三羟甲基氨基甲烷-盐酸), 150 mM NaCl, 1% NP-40,0.1% SDS(不同公司的配比不同,有用Tris-hcl PH=8.0的,加0.5%的去氧胆酸钠)
NP-40(Tergitol-type )是很温和的去垢剂,主要用于全细胞蛋白的提取,全称乙基苯基聚乙二醇-40.
tris-triton组成:10 mM Tris,100 mM NaCl,1 mM EDTA,1 mM EGTA,1% Triton X-100(聚乙二醇辛基苯基醚),10%的甘油,0.1% SDS,0.5% deoxycholate(脱氧胆酸盐).
7. dna溶解液TE
碱性。
DNA是属于碱稳定性的物质,事实上在DNA提取过程中,是需要整个体系处于一个偏碱性的环境的,另外在长期储存的时候DNA也是需要溶解在碱性环境的TE缓冲液中的.相对的,对于RNA来说,它属于酸稳定的物质,所以在提取过程中,提取液是保持在一个酸性环境的。
8. dna提取中TE缓冲液的作用是什么
TE缓冲液是弱碱性,对DNA的碱基有保护性,(DNA在它是的稳定性较好,不易破坏其完整性或产生开环及断裂),包括提取好的DNA也要放在TE缓冲液是保存. 垍頭條萊
9. dna提取缓冲液中各组分的作用是什么
1收集材料。本方法需要聚苯乙烯泡沫塑料球、针线、颜料、牙签来做。
2把珠子涂色。选6种颜色来代表糖类、磷酸和四种碱基。可以任意选择。你需要涂16个“糖类”、14个“磷酸”、4种颜色的小球(代表胞嘧啶、鸟嘌呤、胸腺嘧啶、腺嘌呤)。一种球可以选择是白色的,就不用涂色了。可以不用涂“糖类”的球,可省好多时间。
3把碱基配对好。颜料干了以后,把各个碱基颜色安排好,然后配对。胞嘧啶和鸟嘌呤、胸腺嘧啶和腺嘌呤一定分别是一对。颜色的顺序不重要,只要配对好就行。配对的球中间用牙签穿过,两端留空隙,之后可以插在DNA链上。
4制作双螺旋。用针线缝起15个小球长度的线,一端打结,一端穿过珠子。把“糖类”小球、“磷酸”小球相邻地穿起来,这样做成15个球长度的DNA链。糖类在这里要比磷酸的数量多。确保两条DNA长链的糖、磷酸顺序一致。用线穿过糖和磷酸小球,把一端打上结,防止球掉下。
5把碱基对安在长链上。用串好的牙签插在两条的糖小球上。只能插在糖类上,现实情况DNA就是如此。确保牙签插入得牢固,这样不容易掉下。
6把DNA链扭转一下。把所有牙签插好以后逆时针扭转DNA长链,模仿经典的DNA双螺旋式的样子。大功告成了!