1. 培养基中加多少双抗
培养全能干细胞的培养基是什么动物细胞培养液:糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素、血清或血浆.植物组织培养液的成分:水、无机盐、蔗糖、植物激素(生长素,细胞分裂素)等.干细胞对培养条件要求较高,常用的胚胎肝细胞培养基有mTeSR 1培养基,主要成分有:DMEM、bFGF,EGF、血清、双抗、LIF、谷氨酰胺、二巯基乙醇、非必需氨基酸等。干细胞相关的培养液都必须在5%CO2的气体环境中培养使用。否则会对细胞产生影响。气体是哺乳动物细胞培养生存必需条件之一,所需气体主要有氧气和二氧化碳。氧气参与三羧酸循环,产生供给细胞生长增殖的能量和合成细胞生长所需用的各种成分。开放培养时一般把细胞置于95%空气加5%二氧化碳混合气体环境中。二氧化碳既是细胞代谢产物也是细胞生长繁殖所需成分,它在细胞培养中的主要作用在于维持培养基的pH值。大多数细胞的适宜pH为7.2-7.4,偏离这一范围对细胞培养将产生有害的影响。一般情况下,细胞耐酸性比耐碱性大一些,在偏酸环境中更利于细胞生长。
2. 培养基中双抗加多了
维生素在植物细胞里主要以各种辅酶的形式参与多项代谢活动,促进生长和分化。虽然大多数培养的植物细胞都能合成其生长和发育的所有维生素,但是数量上明显不足,植物细胞的体外培养需要在培养基中加入维生素,且通常以B族维生素为主,使用质量浓度一般为0.110mgL。
其中,盐酸硫胺素(维生素Bsubscript1subscript,thiamine)被认为是组织培养中一种必需的成分,其他还有盐酸吡哆醇(维生素Bsubscript6subscript)、烟酸(维生素Bsubscript3subscript)、生物素(维生素H)、抗坏血酸(维生素C)等,一些培养基中还使用了泛酸(维生素Bsubscript5subscript)、叶酸(维生素Bsubscript12subscript)、核黄素(维生素Bsubscript2subscript)、对氨基苯甲酸和氯化胆碱等。维生素类一般易溶于水(叶酸需先用稀氨水溶解),但耐热性差,高温下易降解。
3. 培养基中加多少双抗体
配制DMEM培养基正常血清没有过滤,双抗体不需要过滤,可添加在前面(如果需要的话,除非双反)培养基的罕见的内容,否则就不需要在零下20摄氏度保存,培养两周跑出去不在4存储任何问题。另外,我不同意与冷冻细胞明显高于血清,没有根据。在ATCC细胞冻存的描述看,我很少使用血清,一般10%二甲基亚砜+90%和冷冻液配方血清中是常用的。冻存存活率极高的细胞。(当然,冷冻也是非常重要的存储过程)
配制DMEM培养基时血清不必要过滤,但我认为双反应进行过滤,毕竟,是不是很麻烦。同时对细胞冷冻血清添加量存在着一定的问题,重要的是冷冻程序,如离心速度不太大,有二甲基亚砜的量不能超过10%,这是非常重要的。
配制DMEM培养基除了DMEM粉末直接加入,也应按照说明书添加碳酸氢钠适量,它是关于2G,pH值可能远大于你所需要的pH值,再加入适量HEPES,约2.38g,pH满意度,根据需要添加双抗,过滤,分装。如果数量不多,储存超过20度,必要时添加血清,血清是不需要消毒,因为合格血清已达到无菌的条件下,摇它
4. 培养基里面加多少双抗
配制DMEM培养基过滤前和过滤后的NaHCO3,双抗体可以添加,也可以不加,Z好能加入浆液过滤,在好的或,见细胞和血清浓度,不同,不同的细胞需要的同时,冻存细胞需要培养基血清含量较高,一般为20%-30%。此外,包装后的培养基和血清过滤,除了被用于一瓶,其他存储在-20度,或一部分,如谷氨酰胺易降解。
配制DMEM培养基可以先用Z后的体积是2/3的水溶解配制,包装袋也需要清洗。2G完全溶解的碳酸氢钠此外,加双抗后,定容至终体积。过滤到零下20摄氏度保存。添加血清的时候。
根据我的经验,配制DMEM培养基正常血清没有过滤,双抗体不需要过滤,可添加在前面(如果需要的话,除非双反)培养基的罕见的内容,否则就不需要在零下20摄氏度保存,培养两周跑出去不在4存储任何问题。另外,我不同意与冷冻细胞明显高于血清,没有根据。在ATCC细胞冻存的描述看,我很少使用血清,一般10%二甲基亚砜+90%和冷冻液配方血清中是Z常用的。冻存存活率极高的细胞。(当然,冷冻也是非常重要的存储过程)
配制DMEM培养基时血清不必要过滤,但我认为双反应进行过滤,毕竟,是不是很麻烦。同时对细胞冷冻血清添加量存在着一定的问题,Z重要的是冷冻程序,如离心速度不太大,有二甲基亚砜的量不能超过10%,这是非常重要的。
配制DMEM培养基除了DMEM粉末直接加入,也应按照说明书添加碳酸氢钠适量,它是关于2G,pH值可能远大于你所需要的pH值,再加入适量HEPES,约2.38g,pH满意度,根据需要添加双抗,过滤,分装。如果数量不多,储存超过20度,必要时添加血清,血清是不需要消毒,因为合格血清已达到无菌的条件下,摇它
5. 培养基中加多少双抗球蛋白
动物细胞的培养基的种类和组成分3类:
1、天然培养基
2、合成培养基
3、无血清培养基
天然培养基:
天然培养基主要取自动物体液或从动物组织分离提取。其优点是营养成分丰富,培养效果良好,缺点是成分复杂,来源受限。天然培养基/液的种类很多,包括生物性液体(如血清);组织浸液(如胚胎浸液);凝固剂(如血浆)等。
合成培养基:
合成培养基(synthetic medium),又称为组合培养基,是通过顺序加入准确称量的高纯度化学试剂与蒸馏水配制而成的,其所含的成分(包括微量元素在内)以及他们的量都是确切可知的。合成培养基一般用于实验室中进行的营养、代谢、遗传、鉴定和生物测定等定量要求较高的研究。
无血清培养基:
无血清培养基和试剂被广泛的应用于培养哺乳动物和无脊椎动物细胞以制备单克隆抗体,病毒抗原和重组蛋白等。大多数的无血清培养基含有向细胞内转运离子的转铁蛋白和调节葡萄糖摄取量的胰岛素,以及一些蛋白质和清蛋白,纤维蛋白,胎球蛋白等,这些蛋白在细胞培养中发挥各种不同的功能,如提供细胞贴壁所需的基质,抗生物反应器剪切力,作为脂质和其他生长分化因子的载体等。
6. 培养基双抗怎么加
1.提前一天将分装好的FBS从—20℃冰箱取出,放于4℃冰箱化冻;
2.在细胞间中将FBS以及其它需要添加的成分(如,丙酮酸钠、抗生素等),按照比例加入DMEM培养基中,作好标签;放入4℃冰箱保存。
配制比例如下:
DMEM(High glucose)/ DMEM培养基(高糖)
谷氨酰胺
50ul
非必需氨基酸
500ul
丙酮酸钠
500ul
B-巯基乙醇
双抗
50ul
血清
7.5ml
LIF
5ul
二、ES细胞培养基
DMEM+15%FBS
2-巯基乙醇
5.5uM
1000X
L-谷氨酰胺
2mM
100X
LIF
1000U/mL
10000X
非必需氨基酸
100uM
100X
双抗
100X
7. 完全培养基双抗比例
以gibco的青霉素链霉素溶液(100x)为例(货号:15140163),含10000IU/ml青霉素,10000ug/ml链霉素,即工作浓度(1x)青霉素、链霉素用量分别为100IU/ml和100ug/ml
8. 培养基中加多少双抗生素
沙保弱培养基是培养真菌最常用的培养基,绝大多数的真菌均可以在其上生长,沙保弱培养基还可以添加抗生素,从而抑制多数细菌和污染真菌的生长速度。
含抗生素的沙保弱培养基多用于皮肤癣菌和绝大多数致病真菌的分离和培养,但值得注意的是含有抗生素的培养基会抑制念珠菌属、隐球菌和少量丝状真菌的生长。