1. PCR为什么用两种引物
不相同，而且是从根本上就不同，即序列不同。 PCR扩增是一段目的基因，”目的“的意思就是指定的序列，指定的方法就是前后各用一条引物定位。所以两条引物一般称为”上游引物“和”下游引物“。两引物分别对应不同的序列，中间就是需要扩增的部分。
2. pcr需要两种不同的引物
一种引物。
需要正反向引物各一条，即一对引物，有些特殊PCR需要多条引物。
pcr技术的基本原理类似于dna的自然复制过程，其特异性依赖于靶序列两端互补的寡核苷酸引物。
pcr是一种体外dna扩增技术，它依赖于dna聚合酶在模板dna、引物和四种脱氧核苷酸存在下的酶促反应。待扩增的DNA片段及其两侧互补的寡核苷酸链引物通过“高温变性-低温退火-引物延伸”三步反复循环，使DNA片段的数量成倍增加，因此在短时间内，我们需要大量的特异性基因片段。
3. pcr为什么用两种引物法
PCR引物又称为寡核苷酸引物，也就是RNA，是由人工合成的，分为两种，引物1和引物2。由于DNA聚合酶只能从核苷酸链的5'端到3'端进行复制，也就是只能识别3'的尾端，而且只能把核苷酸连到已经和DNA模板互补产生的多核苷酸链上，所以引物1和2分别于双链DNA的两条链的尾部（就是末尾是3'端的那一边）结合，为那些脱氧核苷酸提供3'的末端，就相当于开了个头。然后在DNA聚合酶的作用下合成两条新链。而那段引物就成了新链的一部分。其实在生物体内的DNA复制也是这样的一个过程，只是引物是人体自身合成的。
4. pcr用两种引物的原因
可能是你的pcr比较短，一个测序反应就可以了，同时你没有要求测通，因为由于测序原理的原因，从测序引物开始的前几十个碱基是不准或者测不到的，所以如果想知道一个pcr的全部序列就需要一对引物进行双向测序，另一条引物可以是你的扩增引物也可是根据已测序列设计的反向引物。
5. pcr为什么用两种引物方法
PCR反应中有两条引物，即5′端引物和3′引物。设计引物时以一条DNA单链为基准（常以信息链为基准），5′端引物与位于待扩增片段5′端上的一小段DNA序列相同；3′端引物与位于待扩增片段3′端的一小段DNA序列互补。
引物设计的基本原则
• 引物长度：15-30bp，常用为20bp左右。
• 引物碱基：G+C含量以40-60%为宜，G+C太少扩增效果不佳，G+C 过多易出现非特异条带。ATGC最好随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列参照。
• 引物内部不应出现互补序列。
• 两个引物之间不应存在互补序列，尤其是避免3 ′端的互补重叠。
• 引物与非特异扩增区的序列的同源性不要超过70%，引物3′末端连续8个碱基在待扩增区以外不能有完全互补序列，否则易导致非特异性扩增。
6. pcr中用到几种引物
因为PCR第一步要95°加热使DNA变性得到两条单链作为PCR扩展的模板，模板序列不同，所以PCR时要加一对引物。只加一对中的一条扩展速度只有一半。
