1. BSA的基本原理
PCR技术原理和操作
PCR技术是指，在DNA聚合酶催化下，以母链DNA为模板，以特定引物为延伸起点，通过变性、退火、延伸等步骤，体外复制出与母链模板DNA互补的子链DNA的过程。
一、PCR技术的基本原理和操作
1、PCR反应的成分和作用
总体积：一般为25μl～100 μl
（一）Mg2+:终浓度为1。5～2。0mmol/L，其对应dNTP为200 μmol/L，注意Mg2+与dNTPs之间的浓度关系，由于dNTP与Taq酶竟争Mg2+，当dNTP浓度达到1 mmol/L时会YZTaq酶的活性。 Mg2+能影响反应的特异性和产率。
（二）无Mg2+buffer：由纯水、kcl、Tris组成。Tris用于调节反应体系pH值，使Taq酶在偏碱性环境中反挥活性。kcl可降低退火温度，但不能超过50 mmol/L，否则会YZDNA聚合酶活性。
（三）BSA：一般用乙酰化的BSA，起着减少PCR管对Taq酶的吸附作用，对Taq酶有保护作用。
（四）底物（dNTPs）：dNTPs具有较强酸性，其储存液用NaOH调pH值至7。0～7。5，一般存储浓度为 10 mmol/L，各成份以等当量配制，反应终浓度为20～200μmol/L。高浓度可加速反应，但同时增加错误掺入和实验成本；低浓度可提高精确性，而反应速度会降低。
（五）Taq酶：能耐95℃高温而不失活，其Z适pH值为8。3～8。5，Z适温度为75～80℃，一般用72℃。能催化以DNA单链为模板，以碱基互补原则为基础，按5’→3’方向逐个将dNTP分子连接到引物的3’端，合成一条与模板DNA互补的新的DNA子链。无3’→5’的外切酶活性，没有校正功能。某种dNTP或Mg2+浓度过高,会增加其错配率。用量一般为0。5～5个单位/100μl。
（六）模板：PCR对模板DNA的纯度不要求很高，但应尽量不含有对PCR反应有YZ作用的杂质存在，如蛋白酶、核酸酶、TqaDNA聚合酶YZ剂、能与DNA结合的蛋白质。模板DNA的量不能太高，否则扩增可能不会成功，在此情况下可适当稀释模板。
（七）引物：引物浓度一般为0。1～0。5μmol/L，浓度过高会引起错配和非特异扩增，浓度过低则得不到产物或产量过低。引物长度一般15～30个碱基，引物过长或过短都会降低特异性。其3’末端一定要与模板DNA配对，末位碱基Z好选用A、C、G（因T错配也能引发链的延伸）。
引物G+C约占45～55%，碱基应尽量随机分布，避免嘧啶或嘌呤堆积，两引物之间不应有互补链存在，不能与非目的扩增区有同源性。
2、PCR反应步骤和反应条件选择（影响因素）
a、变性：模板变性完全与否是PCR成功的关键，一般先于94℃（或95℃）变性3～10min，接着94℃变性30～60s。
b、退火：退火温度一般低于引物本身变性温度5℃。引物长度在15～25bp可通过公Tm=(G+C)×4℃+(A+T)×2℃计算退火温度，一般退火温度在40～60℃之间，时间为30～45s。如果(G+C)低于50%，退火温度应低于55℃。较高的退火温度可提高反应的特异性。
c、延伸：延伸温度应在Taq酶的Z适温度范围之内，一般在70～75℃。延伸时间要根据DNA聚合酶的延伸速度和目的扩增片段的长度确定，通常对于1kb以内的片段1min是够用的。
以上述三个步骤为一个循环，每一循环的产物均可作为下一个循环的模板，经过n次循环后，目的DNA以2n的形式增加
2. bsa分析法的原理
BSR-seq是基于Bayesian方式来来计算SNP标记和目的基因之间的重组概率。这个方法适合于经费较少，群体数据也不错的实验室进行目标基因定位。由于采用混合RNA测序，可以大大的降低费用，同时也能获得比较好的定位效果。此外，还可以对基因表达进行分析。
材料间的混合会导致差异基因较少，如果候选基因在不同表型亲本之间表现出的差异是为表达差异导致，BSA-seq还可以通过定位和基因表达差异来进一步确认定位的候选基因。
3. bs的工作原理
bs期权定价公式为：C=S·N(d1)-X·exp(-r·T)·N(d2)
其中：d1=[ln(S/X)+(r+σ^2/2)T]/(σ√T)
d2=d1-σ·√T
C—期权初始合理价格
X—期权执行价格
S—所交易金融资产现价
T—期权有效期
r—连续复利计无风险利率
σ—股票连续复利(对数)回报率的年度波动率(标准差)
N(d1)，N(d2)—正态分布变量的累积概率分布函数
4. bsa的作用及原理
1.在重蒸酚中为什么加入0.1%的8-羟基喹啉及少量巯基乙醇？
保存在冰箱中的酚，容易被空气氧化而变成粉红色，这样的酚容易降解DNA，一般不可以使用。为了防止酚的氧化，可加入0.1%的8-羟基喹啉及少量巯基乙醇。8-羟基喹啉是带有淡黄色的固体粉沫，不仅能抗氧化，并在一定程度上能抑制DNase的活性。
2.如何将不同构型的质粒DNA区别开？
由于不同构型的DNA在琼脂糖凝胶电泳中的迁移率不同，ccc DNA的泳动速度最快，通过凝胶电泳方法可将不同构型的DNA区别开。
3.用酚-氯仿抽提细胞基因组DNA时，通常要在酚-氯仿中加少许异戊醇，为什么？
异戊醇可以降低表面张力，从而减少气泡产生。另外，异戊醇有助于分相，使离心后的上层含DNA的水相、中间的变性蛋白相及下层有机溶剂相维持稳定。
4.用乙醇沉淀DNA时，为什么加入单价的阳离子？
用乙醇沉淀DNA时，通常要在溶液中加入单价的阳离子，如NaCl 或 NaAc，Na+中和DNA分子上的负电荷，减少DNA分子之间的同性电荷相斥力，而易于聚集沉淀。
5.在提取RNA时经常使用异硫氰酸胍，有什么作用？
RNA是一种极易降解的核酸分子。高浓度强变性剂异硫氰酸胍使细胞结构迅速被破坏，使RNA从细胞中释放出来。同时高浓度异硫氰酸胍还使细胞内的RNA酶失活，使释放出的RNA不被降解。
6.蛋白印迹中封闭液的作用？
封闭液的作用是封闭未吸附蛋白的部位，以减少非特异性结合背景的影响。常用的封闭液有脱脂奶粉、小牛血清等。
7.DNA通常保存在什么缓冲液中？
采用TE缓冲液，Tris-HCl的缓冲系统，加入EDTA可以螯合二价金属离子进而抑制依赖于二价金属离子的DNA酶的活性，对DNA起到保护作用。
8.在酶切反应缓冲液中为什么加入BSA？
通过提高溶液中蛋白质的浓度，对酶起保护作用。
9.简单的克隆载体必需包括什么？
复制起点；选择标记：主要是抗性基因；多克隆位点：便于外源DNA的插入。
10.用酚抽提细胞DNA时，有什么作用？
使蛋白质变性。
11.在分离DNA时，要使用EDTA，为什么？
EDTA是金属离子螯合剂，螯合二价离子，抑制核酸酶的活性。
12.在分离DNA过程中，造成DNA分子断裂的因素有哪些？
核酸酶降解；化学降解；物理剪切。
13.使用离心机应注意什么？
首先应该根据自己的实验需求选择合适的离心机和转子以及离心管，使用离心机时的工作转速不应该超过离心机、转子以及离心管的最大允许转速。离心前注意严格平衡样品。安装转子和转子盖要规范、准确。离心时要留人看守，发现离心机异常应立即关闭离心机。离心结束后要安放好转子。
14.分子生物学实验室常用的灭菌方法有哪些？
高压蒸汽灭菌、干热灭菌、化学药剂消毒、过滤除菌
15.使用移液器有哪些注意事项？
垂直吸液、慢吸慢放；选择合适的量程范围，不能超过量程使用；选择与移液器匹配的枪头，安装枪头时不要用力太猛；移液器每日用完后，应旋到最大刻度。
5. bsa作用
3%溶bsa溶液配制方法：
取3g BSA，加蒸馏水，定容到100ml就行了。
最常用的封闭剂是0.05%-0.5%的BSA，封闭是否必要，取决于ELISA的模式及具体的实验条件。并非所有的ELISA 固相均需封闭，封闭不当反而会使阴性本底增高。
一般说来，双抗体夹心法，只要酶标记物是高活性的，操作时洗涤彻底，不经封闭也可得到满意的结果。
特别是用单抗腹水直接包被，因其中大量非抗体蛋白在包被时同样也吸附在固相表面，业已起到了类似封闭剂的作用。但在间接法测定中，封闭一般是不可少的。
6. bsg电机工作原理
汉dm混动原理：
（1）EV纯电模式
通常在电池电量充足时，进入电动四驱模式，前后轴分别由P3,P4电机来驱动，这时候汉DM就是一辆纯电动车，节能环保，动力输出线性流畅。
（2）HEV并联驱动模式
如果车辆需要大功率的输出，此时发动机启动，进入并联驱动模式。发动机和电动机同时驱动车辆，百公里4.3S的成绩就是在此种模式下取得的。
（3）HEV串联驱动模式
此种模式下，DM可以看做是一台增程式新能源汽车，与理想ONE，岚图FREE的工作原理完全一样。
P0端BSG电机充当发电机的角色，在发动机的驱动下发电。电能直接供给P3,P4驱动电机，即使是在亏电状态下也能获得EV模式下的动力性和驾驶平顺性。
（4）发动机驱动模式
在此种模式下，车速通常较高，达到了发动机的最佳效率区间。
此时电动机介入反而会降低系统效率，所以此种模式下只靠发动机来驱动前轮，BSG电机将发动机后备功率转化为电能为电池充电。
此时车辆以最经济的方式进行高速运行，并保持电量。
（5）能量回收模式
车辆减速、制动或者下坡时，BSG电机被车轮反拖进行发电，电能储存在锂电池中。
7. BSA方法
车架上的五通的标准：
1、螺纹 英规 BSA，这是最传统的五通标准之一，其螺纹特点为一正一反，左边为正螺纹，右边为反螺纹，左侧顺时针旋紧，右侧逆时针旋紧。其螺纹外径为34.798mm，牙距为1.37*24TPI。此种五通规格在大家的公路与山地车架上最为常见，五通的宽度大多为68与73mm（此种五通宽度在DH车种上会更长，不过本文暂不讨论）。如果你想知道你的五通宽度，最简单的办法就是拿尺子量一量，这个非常简单，普通的直尺即可。
2、螺纹 意规，此种螺纹只出现在意大利的老牌公路自行车上，此种螺纹的特点是都为正螺纹，螺纹外径为36mm，，牙距为36*24TPI。此种五通非常少见，需要配合专用的意规中轴，现在意规很难看到了，我们在此就不详谈了。如果有车友碰上意规的公路车架，自己买个和牙盘对应的意规中轴根据说明即可完成安装。最后再次声明，山地车是绝对不会出现意规中轴的，广大山地车用户可忽略此种螺纹。
3、压入式 BB90 此种五通是以五通宽度来命名的，实际上BB90的车架有89.5mm和92mm两种宽度。五通的内径为41mm，实际上BB90中轴采用压入式的安装方法。
4、压入式 BB86 此种五通是Giant在BB90的基础上发展出来的，和BB90的区别仅为五通宽度86.5mm，此系统的设计初衷应该是为缩小五通宽度以使用更小Q值的牙盘，但是实际上目前的大牌公司并没有推出相应的牙盘，此系统大多仍用的是普通的一体牙盘，所以可以说此系统对QF的改善并无太大意义。
5、压入式BB30 此种五通是FSA与Cannondale联合推广的一种中轴系统，30代表牙盘轴心的直径——30mm，而普通的以Shimano为代表的一体牙盘轴心直径为24mm。此种五通的内径为46mm，宽度为68mm。
8. bsc原理
BSC则是通过改变控制字符来完成链路操作功能，提供的是面向字符的传输功能
9. bsa封闭原理
这个最好用纯度高的。
所谓封闭液的作用就是封闭掉任何有非特异性蛋白的结合位点。
其实BSA并不是最佳的封闭选择，非特异性的IgG，或者Fc端判断才是，可以封闭掉非特异性的Fc结合位点，减少假阳性。
但是考虑到价格的因素
10. bs架构原理
bs架构即浏览器和服务器架构模式，是WEB兴起后的一种网络架构模式，WEB浏览器是客户端最主要的应用软件；这种模式统一了客户端，将系统功能实现的核心部分集中到服务器上，简化了系统的开发、维护和使用。
