【摘要】 目的 建立病毒消口服液中绿原酸含量的高效液相色谱法。方法 色谱柱为Hypersil ODS C18(5μm，4.6mm×100mm)，流动相为乙腈-0.4%磷酸溶液(13∶87)，检测波长为327nm；柱温为25℃；流速为1.01ml/min。结果 绿原酸在112～1120ng(r=0.99998，n=6)范围内呈良好的线性关系；平均回收率为99.08%，RSD为0.57%。结论 本方法简便、快速，测定结果准确，重现性好。 【关键词】 病毒消口服液；绿原酸；高效液相色谱法；含量 Determination of the contents of chloralgenic acid in Bingduxiao Koufuye by HPLC
DEN Ze-yi.The Linli
People’s Hospital of Hunan Province，Linli Hunan 415200，China
【Abstract】 Objective To establish a HPLC method for determining the contents of chloralgenic acid in Bingduxiao Koufuye.Methods Stationary phase was Hypersil ODS C18(4.6min×100mm；5μm)，mobile phase was acetonitrile-0.4% H3PO4 triethylamine(13：87)，election wavelength 327nm，flow rate 1.0ml/min and coulumn temperature 25℃.Results There was good linearity in range of 112～1120ng(r=0.99998，n=6) for chloralgenic acid.The average recovery of chloralgenic acid was 99.08%；RSD was 0.57%.Conclusion This method is simple，fast and accurate.
【Key words】 Bingduxiao Koufuye；chloralgenic acid；HPLC；content
病毒消口服液为我院内科传统制剂，具有清热解毒，祛湿，凉血作用，用于治疗上呼吸道感染、腮腺炎、风热感冒，瘟热等病毒性疾患。该制剂由银花、板蓝根、连翘、重楼等组成。为更好地控制该制剂质量，保证用药安全有效，笔者进行了定量研究，采用高效液相色谱法测定方中绿原酸的含量，现报告如下。
1 仪器与试药
高效液相色谱仪：Agilent 1100系列四元梯度泵、Agilent 1100 手动进样器、Agilent 1100系列二极管阵列检测器、Agilent 1100工作站(Agilent 公司)；超声波清洗器(昆山市淀山湖检测仪器厂)。乙腈(色谱纯，上海陆都化学试剂厂，20040125)，其余所用试剂均为分析纯。绿原酸(中国药品生物制品检定所，753-2002210)；病毒消口服液(本院自制，20040911、20041112、20041217)。
2 绿原酸的含量测定
2.1 色谱条件
色谱柱：Hypersil ODS C18 5μm Φ4.6mm×100mm；流动相：流动相为乙腈-0.4%磷酸溶液(13∶87)，检测波长为327nm；柱温为25℃；流速为1.0ml/min。理论塔板数以绿原酸计不低于2000。
2.2 对照品溶液的制备
精密称取绿原酸对照品14.00mg，置25ml棕色量瓶中，加50%甲醇溶液稀释至刻度，摇匀；精密量取1ml，置10ml量瓶中，加50%甲醇至刻度，摇匀，作为对照品溶液。
2.3 线性范围的考察
精密吸取上述对照品溶液2、4、6、8、10、20μl，按上述色谱条件测定峰面积，以对照品峰面积为纵坐标，以对照品的量为横坐标进行线性回归，结果表明绿原酸在112～1120ng范围内呈线性关系。Y=2.2849X+7.2836，r=0.99998(见图1)。
2.4 供试品溶液的制备
精密量取病毒消口服液5ml，置蒸发皿中，水浴蒸干，残渣再加甲醇溶解，并定容于10ml量瓶中，作为供试品溶液。
2.5 空白试验
取去银花、蒲公英的阴性制剂，按2.4项下方法制得阴性对照液，以上述色谱条件测定。结果阴性对照液与绿原酸相同保留时间处，无色谱峰出现。色谱图见图1。
2.6 精密度试验
取同一浓度的绿原酸对照品溶液，在上述色谱条件下测定，重复进样5次，测定结果RSD为1.76%(n=5)。结果表明进样精密度良好。
2.7 稳定性试验
取供试品溶液，分别于配制0、1、2、4、8、24h依法测定，结果RSD为0.63%(n=5)。
2.8 重复性试验
取批号010531的样品5份，分别按2.4项下方法制得供试液，测定绿原酸平均含量为0.81mg/片，RSD为1.81%(n=5)，结果表明样品测定重现性良好。
2.9 加样回收试验
精密量取已知含量的010531供试品3.0ml，置10ml量瓶中，各精密加入一定浓度的对照品溶液(取绿原酸8.16mg，置10ml量瓶中，加50%甲醇溶解并定容至10ml，摇匀，即得)1ml，分别按2.4项下方法制得供试液，以上述色谱条件测定绿原酸含量，绿原酸平均回收率为99.08%，RSD为0.57%。结果见表1。表1 绿原酸的回收率试验结果 (略)
2.10 样品的测定
精密量取20040911、20041112、20041217的病毒消口服液样品，按2.4项下方法制得供试液，测定结果见表2。色谱图见图1。表2 病毒消口服液中绿原酸测定结果 (略)
3 讨论
在测定制剂中绿原酸含量时，曾参阅文献方法［1，2］对流动相进行了选择，结果以乙腈-0.4%磷酸溶液(13：87)分离效果较好。
采用高效液相色谱法直接测定病毒消口服液中绿原酸的含量，绿原酸峰形对称，分离完全，图谱简单，方法简便、快速，准确度高，重现性好，可作为该制剂的质控方法。
【参考文献】
1 王喜军.高效液相色谱在中药研究中的应用.哈尔滨：黑龙江科学技术出版社，1996，26.
2 王宝琴.中成药质量标准与标准物质研究.北京：中国医药科技出版社，1994，260.
