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高效液相色谱法测定病毒消口服液中绿原酸的含量

【摘要】 目的 建立病毒消口服液中绿原酸含量的高效液相色谱法。方法 色谱柱为Hypersil ODS C18(5μm,4.6mm×100mm),流动相为乙腈-0.4%磷酸溶液(13∶87),检测波长为327nm;柱温为25℃;流速为1.01ml/min。结果 绿原酸在112~1120ng(r=0.99998,n=6)范围内呈良好的线性关系;平均回收率为99.08%,RSD为0.57%。结论 本方法简便、快速,测定结果准确,重现性好。   【关键词】 病毒消口服液;绿原酸;高效液相色谱法;含量   Determination of the contents of chloralgenic acid in Bingduxiao Koufuye by HPLC

DEN Ze-yi.The Linli

People’s Hospital of Hunan Province,Linli Hunan 415200,China

【Abstract】 Objective To establish a HPLC method for determining the contents of chloralgenic acid in Bingduxiao Koufuye.Methods Stationary phase was Hypersil ODS C18(4.6min×100mm;5μm),mobile phase was acetonitrile-0.4% H3PO4 triethylamine(13:87),election wavelength 327nm,flow rate 1.0ml/min and coulumn temperature 25℃.Results There was good linearity in range of 112~1120ng(r=0.99998,n=6) for chloralgenic acid.The average recovery of chloralgenic acid was 99.08%;RSD was 0.57%.Conclusion This method is simple,fast and accurate.

【Key words】 Bingduxiao Koufuye;chloralgenic acid;HPLC;content

病毒消口服液为我院内科传统制剂,具有清热解毒,祛湿,凉血作用,用于治疗上呼吸道感染、腮腺炎、风热感冒,瘟热等病毒性疾患。该制剂由银花、板蓝根、连翘、重楼等组成。为更好地控制该制剂质量,保证用药安全有效,笔者进行了定量研究,采用高效液相色谱法测定方中绿原酸的含量,现报告如下。

1 仪器与试药

高效液相色谱仪:Agilent 1100系列四元梯度泵、Agilent 1100 手动进样器、Agilent 1100系列二极管阵列检测器、Agilent 1100工作站(Agilent 公司);超声波清洗器(昆山市淀山湖检测仪器厂)。乙腈(色谱纯,上海陆都化学试剂厂,20040125),其余所用试剂均为分析纯。绿原酸(中国药品生物制品检定所,753-2002210);病毒消口服液(本院自制,20040911、20041112、20041217)。

2 绿原酸的含量测定

2.1 色谱条件

色谱柱:Hypersil ODS C18 5μm Φ4.6mm×100mm;流动相:流动相为乙腈-0.4%磷酸溶液(13∶87),检测波长为327nm;柱温为25℃;流速为1.0ml/min。理论塔板数以绿原酸计不低于2000。

2.2 对照品溶液的制备

精密称取绿原酸对照品14.00mg,置25ml棕色量瓶中,加50%甲醇溶液稀释至刻度,摇匀;精密量取1ml,置10ml量瓶中,加50%甲醇至刻度,摇匀,作为对照品溶液。

2.3 线性范围的考察

精密吸取上述对照品溶液2、4、6、8、10、20μl,按上述色谱条件测定峰面积,以对照品峰面积为纵坐标,以对照品的量为横坐标进行线性回归,结果表明绿原酸在112~1120ng范围内呈线性关系。Y=2.2849X+7.2836,r=0.99998(见图1)。

2.4 供试品溶液的制备

精密量取病毒消口服液5ml,置蒸发皿中,水浴蒸干,残渣再加甲醇溶解,并定容于10ml量瓶中,作为供试品溶液。

2.5 空白试验

取去银花、蒲公英的阴性制剂,按2.4项下方法制得阴性对照液,以上述色谱条件测定。结果阴性对照液与绿原酸相同保留时间处,无色谱峰出现。色谱图见图1。

2.6 精密度试验

取同一浓度的绿原酸对照品溶液,在上述色谱条件下测定,重复进样5次,测定结果RSD为1.76%(n=5)。结果表明进样精密度良好。

2.7 稳定性试验

取供试品溶液,分别于配制0、1、2、4、8、24h依法测定,结果RSD为0.63%(n=5)。

2.8 重复性试验

取批号010531的样品5份,分别按2.4项下方法制得供试液,测定绿原酸平均含量为0.81mg/片,RSD为1.81%(n=5),结果表明样品测定重现性良好。

2.9 加样回收试验

精密量取已知含量的010531供试品3.0ml,置10ml量瓶中,各精密加入一定浓度的对照品溶液(取绿原酸8.16mg,置10ml量瓶中,加50%甲醇溶解并定容至10ml,摇匀,即得)1ml,分别按2.4项下方法制得供试液,以上述色谱条件测定绿原酸含量,绿原酸平均回收率为99.08%,RSD为0.57%。结果见表1。表1 绿原酸的回收率试验结果 (略)

2.10 样品的测定

精密量取20040911、20041112、20041217的病毒消口服液样品,按2.4项下方法制得供试液,测定结果见表2。色谱图见图1。表2 病毒消口服液中绿原酸测定结果 (略)

3 讨论

在测定制剂中绿原酸含量时,曾参阅文献方法[1,2]对流动相进行了选择,结果以乙腈-0.4%磷酸溶液(13:87)分离效果较好。

采用高效液相色谱法直接测定病毒消口服液中绿原酸的含量,绿原酸峰形对称,分离完全,图谱简单,方法简便、快速,准确度高,重现性好,可作为该制剂的质控方法。

【参考文献】

1 王喜军.高效液相色谱在中药研究中的应用.哈尔滨:黑龙江科学技术出版社,1996,26.

2 王宝琴.中成药质量标准与标准物质研究.北京:中国医药科技出版社,1994,260.