高压灭菌设备主要是指高压蒸汽灭菌锅，有立式、卧式和手提式等多种。使用时要严格遵守操作规程，下面以立式高压蒸汽灭菌锅为例介绍具体操作方法： （1）打开进水阀，向漏斗中加水，或打开锅盖向锅内加水，当水达到水位标记高度时停止加水，并关闭阀门。有的锅直接通蒸汽则不用加水； （2）打开排气口，然后点火或通电加热，再装入待灭菌物品，但不要放得太挤，以免影响蒸汽流通，造成灭菌不彻底； （3）盖好锅盖，以对角线均匀逐一拧紧螺丝，使锅密闭。当水沸腾后，锅内充满水蒸气，冷空气就从排气囗排出； （4）待冷空气排尽后，关闭排气囗。蒸汽猛烈上升后要继续放冷气5~10分钟，否则压力表会出现假升压现象，即压力表虽然已指到0.11兆帕（l千克/厘米2），而锅内温度却只有100℃，因而会造成灭菌不彻底； （5）当压力表显示出所需压力时，如培养基中含有葡萄糖等不耐热成分，则用0.11兆帕（1.05千克/厘米2）压力灭菌25~30分钟，如培养基是由木屑、玉米芯等组成，则用0.11~0.14兆帕（1.05~1.5千克/厘米2）压力灭菌l.5~2小时，调节火力，使压力保持稳定，记下灭菌开始时间，维持压力至规定时间后熄火或断电，自然降压； （6）灭菌完毕，应使锅内压力缓慢下降至0.05兆帕（0.5千克/厘米2）以下，方可打开放气阀，否则由于锅内突然减压，会引起培养基和其它液体从容器内喷出，或沾湿棉塞，导致杂菌污染或塑料袋胀破造成损失；当压力表指示下降到0.05兆帕（0.5千克/厘米2）时，打开放气阀缓慢放气。待压力下降至零时，方能打开锅盖，取出灭菌物；压力表指针未降到零时，不能打开锅门，以防被灭菌物破裂喷出伤人； （7）若连续使用，应注意补充锅内水量。使用完毕，立即打开出水阀和冷凝出水口，放尽锅内的余水，使锅内保待干燥，以防日久生锈。 在没有专用高压灭菌锅时，少量培养基及用具，也可用家庭厨用的高压锅进行灭菌，同样可达到彻底灭菌的目的。操作方法是在锅内加入足够量的水（5~6厘米），将待灭菌物品放在锅内的搁板上，盖好锅盖，打开煤气开关上旺火，待锅内大量蒸汽排出5~6分钟后，扣上限压阀，小火连续灭菌30分钟，从灶上取下锅，待冷却后，缓慢取下限压阀，排出余气后，打开锅，取出灭菌物。
